Observación de microorganismos en el microscopio

Examen en fresco

También conocido como montaje húmedo, es una técnica sencilla que consiste en colocar el material a examinar entre un porta y un cubreobjetos; si se trata de un producto sólido, se realizará previamente una suspensión del mismo en agua destilada o solución salina, estériles. Para la observación se utiliza usualmente el microscopio óptico con el condensador bajo, para lograr el contraste adecuado, y el objetivo seco fuerte (40x). La microscopia de contraste de fases y de campo oscuro facilitan la observación de estructuras con bajo índice de refracción, que pasarían inadvertidas con el microscopio de campo claro; sus indicaciones son muy precisas.

El examen en fresco se dirige principalmente a la detección de bacterias directamente en las muestras a cuantificar su concentración, a obtener alguna información sobre su morfología y, con frecuencia, a determinar la motilidad de una especie aislada.

Las burbujas de aire producidas por un mal montaje, los artefactos, las deficiencias o suciedades del portaobjetos y otros pormenores pueden confundir al observador no experto.

El examen en fresco puede ayudarse de recursos que facilitan la visualización de ciertos microorganismos:

-La simple adición de azul de metileno u otro colorante favorece la diferenciación de los elementos celulares.

-La preparación con tinta china (método de Burri) o nigrosina permite la evidenciación de la cápsula microbiana, como un halo transparente que rodea a la célula. Se utiliza para el diagnóstico de infección por Cryptococcus.

-El montaje con potasa al 10% en caliente (agente queratolítico) o con azul de lactofenol es de gran utilidad para el estudio de estructuras fúndicas, sobre todo de hongos dermatofitos.

-La preparación con solución yodada (lugol) es de elección para identificación de algunas parasitosis intestinales.

Preparación húmeda: es la forma más simple de examinar las bacterias y otros microorganismos vivos, y consiste en la suspensión de un inoculo de cultivo en agua u otro líquido, colocando una gota de ésta suspensión en un portaobjeto común y cubrirlo con un cubreobjetos.

Preparación de la gota pendiente: ésta técnica requiere de un portaobjeto con una concavidad o depresión circular en su centro (portaobjeto excavado)

Técnica:

1.    Colocar un anillo delgado de vaselina alrededor de la depresión central.

2.    Depositar una gota de solución fisiológica en el centro del cubreobjetos y emulsionar en ella el material a examinar si proviene de un cultivo sólido o utilizar una gota de cultivo si es líquido.

3.    Invierta el portaobjeto de manera tal que la excavación central quede encima de la gota del cubreobjetos.

4.    Presione el portaobjeto y luego inviértalo con un movimiento rápido. La gota que contiene el material quedará pendiendo sobre la excavación del portaobjeto.

Con el estudio de la gota pendiente, se puede conocer la motilidad de los microorganismos, sus agrupaciones naturales, sus reacciones en presencia de ciertas sustancias químicas.